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嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定 參考GB 5413.20-2022
更新時間:2024-06-11   點擊次數(shù):553次

本實驗按照《GB 5413.20-2022 食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定》中第三法液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法,對膽堿標準品及實際樣品進行了測定。



01

標準品分析結果

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按照《GB 5413.20-2022 食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定》中LC-MS方法,對膽堿標準品進行了分析。

國標方法中使用Amide色譜柱,本實驗使用等效HILIC型PC色譜柱(磷酸膽堿鍵合型HILIC色譜柱)進行了分析,由于CAPCELL CORE PC色譜柱保留能力更強,考慮整體分析時間,以及蛋白樣品可能在初始比例有機相中析出等問題,我們將初始有機相百分比降低至80%進行了分析。

如圖1所示,膽堿標準品保留時間為3.0 min,峰型良好。

同時我們按照國標方法中的要求,對膽堿系列濃度標準品(0.010 -0.200 mg/L)進行分析,得到良好線性結果,r=0.9979,如圖2所示。

方法檢出限為0.18 mg/100g,滿足方法檢出限要求。

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圖1  標準品分析結果

【色譜條件】

色譜柱:CC PC S2.7; 2.1 ×100mm

流動相:A:10 mmol/L甲酸銨,甲酸調(diào)節(jié)pH為5.0

流動相:B:乙腈

流動相:B%  80%(0min) - 80%(1min) - 60%(3min) - 60%(5min) - 80%(5.1min) - 80%(8min)

速:0.3 mL/min

度:40 ℃

測:LC-MS; ESI; 104.1>60.0(CE 22 DP 80); 104.1>45.0(CE 26 DP 80)

度:0.3 mg/mL

進樣量:2 µL

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圖2  線性分析結果


02

樣品分析結果 

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按照國標中19.1樣品前處理方法,對液態(tài)牛奶樣品進行了前處理,進樣分析,得到結果如圖3所示,牛奶樣品中含有膽堿量為1.08 mg/100g。

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圖3 牛奶樣品分析結果

【色譜條件】

色譜柱:CC PC S2.7; 2.1 ×100mm

流動相:A:10 mmol/L甲酸銨,甲酸調(diào)節(jié)pH為5.0 

流動相:B:乙腈

流動相:B%  80%(0min) - 80%(1min) - 60%(3min) - 60%(5min) - 80%(5.1min) - 80%(8min)

速:0.3 mL/min

度:40 ℃

測:LC-MS; ESI; 104.1>60.0(CE 22 DP 80); 104.1>45.0(CE 26 DP 80)

度:0.3 mg/mL

進樣量:2 µL


樣品制備:稱取2.5 g試樣,用溫水溶解后, 轉移至25 mL容量瓶中,冷卻至室溫,用水定容混勻。吸取1 mL樣液于50 mL比色管中,加入1 mol/L的鹽酸溶液10 mL,搖晃均勻,超聲振蕩5 min。樣液在70 ℃水浴中加熱3 h,冷卻至室溫后用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至5.0, 轉移至100 mL容量瓶,用水定容,混勻。然后用流動相A稀釋10倍后,經(jīng)0.22 µm水性濾膜過濾至進樣瓶中,待測。


03

分析注意事項 

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(1)在進樣過程中發(fā)現(xiàn),由于該分析方法初始比例為高比例乙腈,高比例乙腈有可能導致樣品中剩余的少量蛋白在流動相條件中析出,堵塞色譜柱造成柱壓升高。可考慮在樣品配置后,使用初始比例流動相對樣品進行最終稀釋進樣。

(2)HILIC系色譜柱日常使用維護與反相色譜柱有較大差別,需注意HILIC色譜柱的沖洗和保存。

04

結論

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綜上所述,使用CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1 mm i.d.×100 mm色譜柱,按照《GB 5413.20-2022 食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定》中第三法液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法,能夠獲得良好檢測結果,滿足標準要求。

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